我们的富集标准为:在同一轮筛选中,结合目标蛋白的噬菌体数目:结合阴性蛋白或者封闭液的噬菌体数目>5)后,我们将通过两种方法获得阳性Binder。
1)随机挑取富集轮的噬菌体克隆,在深孔板中扩大培养,进行phage ELISA。对Phage ELISA阳性克隆进行单克隆基因测序,对序列进行比对,获得Unique序列,并按照phage ELISA数值进行亲和力排序;
2)对富集轮的噬菌体进行PCR扩增获得抗体基因,通过二代测序(NGS)获得所有Binder的序列,并按照基因数目进行频率排序,理论上频率越高,亲和力越高。
蛋白固相筛选已完结,敬请期待下一系列视频~
蛋白 固相筛选(3)
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